IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS PROBIÓTICOS EN PRODUCTOS
LÁCTEOS: BIFIDOBACTERIAS
Carla Vallejos Castro1, María Clara Hostench2, Daniela Kuba1, Sandra Nair Sarquis1, Marcela Andrea Alvarez2 INTI Lácteos1, INTI Agroalimentos2 cvallejos@inti.gob.ar
Introducción
De acuerdo a la Organización Mundial de la Salud, se define como probióticos a “los microorganismos vivos que, cuando son suministrados en cantidades adecuadas promueven beneficios en la salud del organismo huésped”. Hasta el momento la legislación no permite aludir en el etiquetado de los productos alimenticiós a propiedades benéficas para la salud, pero si declarar la presencia de cultivos probióticos. Por otra parte en enero del presente año el Consejo para la Nutirción Responsable (CRN) y la Asociación Internacional de Probióicos han desarrollado una base científica conteniendo directrices de buenas prácticas para el etiquetado, almacenamiento y pruebas de estabilidad, de los suplementos dietéticos de alimentos funcionales que contienen probióticos. (IPA International Probiotics Association, 2017). Por lo antes señalado, desde el año 2016 los laboratorios de microbiología de Agroalimentos y Lácteos trabajan en un proyecto destinado a la evaluación cualicuantitativa de la viabilidad y estabilidad de los microorganismos probióticos en productos lácteos que declaren su contenido.
declaran la presencia de bifidobacterias como cultivo probiótico. A partir de cada producto se siguieron las metodologías cultivo independiente (1) y cultivo dependiente (2), como indica la figura 1. En el primer caso (1) la extracción de ADN se realiza directamente del producto por medio de un Kit comercial y en el segundo caso (2) se realizan recuentos en un medio de cultivo selectivo (TOS-MUP), donde se verifica el número presuntivo de bifidobacterias viables, durante y al final de la vida útil del producto y luego se realiza la extracción de ADN desde las colonias típicas seleccionadas. En ambos casos (1) y (2) se realiza la identificación molecular del género Bifidobacterium, por medio de la técnica PCR (Polymerase Chain Reaction) especie– específica, la cual utiliza primers específicos, que amplifica una región del gen 16S rARN de 490 pares de base (pb), como indica la figura 3, según lo descripto por Wenwei Lu y col. 2015.
Objetivo
El objetivo del presente trabajo es identificar y evaluar la viabilidad y estabilidad de las bifidobacterias durante la vida útil de diferentes productos lácteos del mercado, mediante la utilización de técnicas de microbiología tradicional de recuento y de biología molecular. El presente trabajo adquiere relevancia considerando que la evaluación de probióticos, podría ser en un futuro, un requisito de calidad para la comercialización de los productos mencionados.
Descripción
Las leches fermentadas constituyen el principal vehículo de probióticos y los grupos bacterianos más utilizados pertencen al género Lactobacillus y Bifidobacterium. En el presente trabajo se presentan los resultados obtenidos de productos que
Figura 1. Diagrama de flujo del método de trabajo, por producto y fecha de análisis. *TOS (Transgalactosylated Oligosaccharide Mixture)
Suplemento MUP (Mupirocin Lithium Salt).
Resultados
Fecha de Análisis
Lote Vencimiento
Recuento de Bifidobacterium
(ufc/g)
Producto A1: bebible sabor kiwi
Dentro vida
útil 07/01/2016
1
24/01/16
4,4 x107
Al vto
22/01/2016
1
24/01/16
5,2 x107
Producto A2: pote, sabor ciruela.
Dentro vida
útil 29/03/2016
2
20/04/16
7,5 x107
Al vto
28/04/2016
2
20/04/16
8,6 x107
Producto A3: bebile (sachet), sabor ciruela
Dentro vida
útil
3
24/04/16
4,3 x107
29/03/2016
Al vto 28/04/2016
3
24/04/16
1,7 x107
Producto A4: bebile (sachet), sabor ciruela
Dentro vida
útil
4
11/09/16
6,8 x107
19/08/2016
Al vto 09/09/2016
4
11/09/16
6,8 x107
Producto A5: pote, sabor ciruela
Dentro vida
útil
5
07/09/16
9,1 x107
19/08/2016
Al vto 09/09/2016
5
07/09/16
1,2 x108
Producto A6: pote, sabor ciruela
Dentro vida
útil
6
06/01/17
1,1 x107
13/12/2016
Al vto 06/01/2017
6
06/01/17
1,5 x107
Producto A7: pote, sabor ciruela.
Dentro vida
útil
7
06/01/17
1,4 x107
13/12/2016
Al vto 06/01/2017
7
06/01/17
1,6 x107
Producto A8: pote, sabor ciruela
Dentro vida
útil 13/12/2016
8
06/01/17
1,3 x107
Al vto 06/01/2017
8
06/01/17
1,2 x107
Producto A9: pote, sabor ciruela.
Dentro vida
útil
9
06/01/17
1,2 x107
13/12/2016
Al vto 06/01/2017
9
06/01/17
1,2 x107
Producto A10: pote, sabor ciruela.
Dentro vida
útil
10
06/01/17
9,9 x106
13/12/2016
Al vto 06/01/2017
10
06/01/17
1,1 x107
Figura 2. Vista al microscopio de bifidobacterias
Figura 3. Calle 1 y 10: Marcador de peso molecular, calle 2 a 6: colonias aisladas desde el producto lácteo, calle 7: control de reactivos, calle 8: control positivo B. pseudolongum pseudolongum LMG11571, calle 9: control negativo Lactobacillus plantarum ATCC14917.
Conclusiones
Se obtuvo la banda de 490 pb esperada, lo que indica la presencia del género Bifidobacterium en la totalidad de los productos analizados mediante la técnica cultivo independiente (1). Mediante la técnica cultivo dependiente (2), se obtuvieron los mismos resultados a partir de las colonias aisladas del medio selectivo de recuento. En este medio se obtuvieron recuentos del orden de 1.0x107 ufc/g de bifidobacterias, durante la vida útil del producto y en la fecha de vencimiento del mismo. Comprobando así, la estabilidad y viabilidad de las bacterias probióticas presentes, como indica el CAA en el art. 1389.
Bibliografía
Enumeración presuntiva de bifidobacterias Norma ISO 29981:2010.
IPA International Probiotics Association (2017). Directrices para las buenas prácticas de etiquetado almacenamiento y estabilidad de productos con el contenido de probióticos.
Wenwei Lu, W.Kong, Pu Yang, Jian Kong (2015) International Dairy Journal 41(7-12) “A one-step PCR-based method for specific identification of 10 common lactic acid bacteria and Bifidobacterium in fermented milk.”
Ver+/-
