Efectos del suministro de alimentación diferencial sobre la concentración de ácidos conjugados del linoleico (CLA) en leches de cabra
Rodríguez, M. A.(i); Pellegrini, P. (iv);Gagliostro ,G.(iii) ;Gatti, P.(i); Castañeda, R.(i); Muset, G. (ii);
(i)INTI-Lacteos (ii)INTI-Coordinación Provincia de Buenos Aires (iii) INTA Balcarce Estación Esperimenta (iv) Becario SECyTl
Introducción La leche y sus derivados lácteos representan una fuente valiosa de energía y nutrientes. El término genérico de alimento funcional se utiliza para identificar alimentos y/o componentes de los mismos que poseen propiedades adicionales sobre la salud de los consumidores. Existe un reconocimiento general sobre ciertos alimentos como los lácteos que ejercen una acción preventiva frente a la aparición de enfermedades degenerativas en el ser humano. Actualmente, la investigación se orienta hacia la valoración de dichos alimentos obtenidos naturalmente frente a la utilización de ingredientes de síntesis.
La composición en ácidos grasos de la leche de cabra es uno de los parámetros de mayor influencia sobre el valor funcional del producto y dicha composición es modificable a través de la suplementación estratégica. Los ácidos linoleicos conjugados constituyen una mezcla de isómeros del ácido linoleico (C18:2) con dobles ligaduras en las posiciones 7 y 9; 9 y 11 ; 10 y 12 ó 11 y 13 además de variaciones geométricas del tipo cis-cis, cis-trans, trans-cis o trans-trans. El isómero cis-9, trans-11 CLA representa mas del 90% del total de CLA en leche. Los CLA resultan predominantemente consumidos en los productos lácteos y presentarían importantes propiedades benéficas sobre la salud humana: prevención del cáncer, efectos anti-aterogénicos y antidiabetogénicos.
La suplementación dietaria de la alimentación de la cabra es la vía mas rápida y eficaz para modificar la calidad de la grasa láctea a fin de producir naturalmente leche y derivados lácteos con calidad funcional. Es un producto que puede utilizarse para sustituir a la leche de vaca en la alimentación infantil o en casos de intolerancia digestiva o alergia a esta última.
El objetivo del presente trabajo fue conocer el impacto del suministro de aceite de pescado solo y en combinación con aceite de girasol sobre el perfil de ácidos grasos de la leche de cabra con especial énfasis en las concentraciones de CLA.
Metodología / Descripción Experimental El ensayo de campo se llevo a cabo en el Establecimiento La Piedra, situado en al localidad de Batan, Pcia de Buenos Aires. Se realizo sobre un total de 123 cabras en ordeño de raza Saanen, se apartaron 10 animales al azar que se encontraban en el 7° y 8° mes de lactancia.
El plan de alimentación tuvo una duración de 20 días. Durante los primeros 6 días todos los animales recibieron la misma alimentación para conocer la composición basal en AG de la grasa butirosa. En el sexto día y previo a la implementación de los tratamientos alimenticios se extrajeron muestras para el análisis del perfil de ácidos grasos por cromatografía gaseosa. A partir del séptimo día de ensayo las cabras fueron divididas al azar en dos grupos de cinco animales cada uno. En el tratamiento 1 (T1) las cabras fueron suplementadas con 30 g de aceite de pescado (AP), mientras que en el tratamiento 2 (T2) los animales recibieron 30 g de AP y 150 g de aceite comercial de girasol (AGi). Las dosis fueron ajustadas a fin de aportar un 1%(AP) y un 5% (AGi) del consumo total. El perfil de ácidos grasos de los aceites utilizados para la suplementación de las cabras se presenta en la Tabla 1.-
El forraje de base estuvo representado por un verdeo de trigo con consumo a voluntad. El aceite de pescado fue desodorizado y saborizado para mejor aceptación. En ambos tratamientos, los aceites fueron suministrados en mezcla con el grano de maíz y las cabras se racionaron en forma individual atadas en estacas y utilizando potes
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separados.
Tabla 1: Composición en ácidos grasos del aceite de pescado y
de girasol utilizado en la suplementación de las cabras
experimentales.
Ácido graso %
Aceite de pescado Aceite de girasol
C14:0 C14:1 C15:0 C15:1 C16:0 C16:1 C16:2 C16:3 C17:0 C17:1 C18:0 C18:1 C18:2 n6 C18:3 n3 C18:4 n3 C20:4 n3 C20:5 n3 (EPA) C22:6 n3 (DHA) Total AG saturados Total AG insaturados Total n-6 Total n-3 Relación n-6/n-3
3,77 (±0,76)
0,62 (±0,00) 0,40 (±0,38) 19,02 (±2,82) 5,78 (±0,62)
0,45 (±0,057) 0,45 (±0,049) 3,06 (±0,198) 24,57 (±1,04) 17,04 (±0,969) 1,49 (±0,035) 2,58 (±2,55) 1,12 6,71 (±0,24) 11,02 (±1,259) 26,92 71,16 17,04 22,92 0,74
5,8 (±0,07)
3,2 (±0,00) 32,6 (±0,32) 55,2 (±0,16) 0,3 (±0,02)
9,00 88,1 55,2 0,3 184
Al final del periodo de alimentación experimental (día 20) se tomaron muestras adicionales de leche de cada cabra para la determinación del perfil de ácidos grasos en leche.
La metodología de análisis se desarrollo en base a antecedentes que están incluidos en la Norma IRAM 5650 Parte II. La extracción de la grasa butirosa se realizó colocando partes iguales de leche cruda y de una solución de un agente tensioactivo compuesta por 12 ml de Tritón X-100, 50 ml de alcohol isopropílico, 2,5 g de urea, 25 g de hexametafosfato de sodio y la cantidad de agua destilada cantidad necesaria para preparar 500 ml de solución. La extracción fue llevada a cabo en una estufa a una temperatura de 90 °C. La capa superior o fase grasa obtenida fue removida de la capa acuosa y transferida a un vial de almacenamiento. Los ésteres metílicos de los ácidos grasos fueron obtenidos a partir de 45 mg de grasa butirosa agregando a la misma 0,3 ml de una solución al 10% de metóxido de sodio en metanol.
El proceso de metilación y esterificación se llevo a cabo en un baño de agua a 67°C en agitación constante durante un minuto para permanecer luego en reposo durante tres minutos más a la misma temperatura. Posteriormente se agregó a la muestra una mezcla (1:1) de cloruro de calcio y sílica gel y se agitó en un dispositivo Vortex. Se incorporaron 1,5 ml de disulfuro de carbono y se centrifugó durante 10 min. a 1800 rpm. El sobrenadante
fue transferido a un vial de vidrio quedando listo
para su análisis por cromatografía gas-líquida.
Para tal fin se inyectó 1 µl de cada muestra en
un cromatógrafo gaseoso (Agilent 6890 series
plus) sobre una columna capilar (Restek 2340,
60m x 0,25mm x 0,2 µm). Las condiciones
cromatográficas utilizadas fueron: temperatura
inicial del horno 180 ºC durante 19 minutos, con
rampa de 5 ºC/min. hasta alcanzar una
temperatura final de 215 ºC durante 4 minutos.
Se utilizó nitrógeno como gas carrier con un
flujo de 20 ml/min. La temperatura del inyector
fue de 250ºC y la del detector de ionización de
llama (FID) fue mantenida a 300 ºC.
Los isómeros individuales de CLA
(cis9,trans11-18:2;
trans10,cis12-18:2;
trans9,trans11-18:2; cis9,cis11-18:2) fueron
identificados utilizando estándares específicos
provistos por Matreya Inc. (Cat# 1255; 1254;
1257; 1256). Los estándares individuales para el
trans-C18:1, C20:4, C20:5 y C22:6 fueron
comprados a Sigma (cat# V1381; A9298;
E2012; D2659).
Los resultados se expresan en gramos
de cada ácido graso/100 g del total de ácidos
grasos (porcentaje en peso).
Resultados
El aceite de pescado presentó valores moderados de EPA y de DHA con un porcentaje alto de C18:2n6. La composición en ácidos grasos del aceite de pescado puede variar en función a la época del año, la especie utilizada y el proceso de elaboración. Desde el punto de vista de maximizar las concentraciones de CLA en leche, la presencia de C18:2n6. en el aceite de pescado resulta favorable e inclusive aconsejable ya que parte del C18:2n6 será transformado directamente en CLA y en el isómero precursor (el trans 11C18:1) a nivel ruminal. El aceite de girasol presentó valores normales de C18:2 n6. El perfil inicial y final de ácidos grasos en la leche obtenidos para cada tratamiento se presenta en el Tabla 2.
Las concentraciones de CLA en leche resultaron fuertemente incrementadas ante el aporte de aceite de pescado (+592% respecto a basal, y ante la combinación de ambos aceites (860%) respecto al nivel de pre-suplementación. El CLA representa un compuesto intermedio en la hidrogenación ruminal del ácido linoleico (cis-9, cis-12 C18:2) a ácido esteárico (C18:0). El ácido trans-11 C18:1 (o ácido vaccénico) resulta un intermediario común en la biohidrogenación del ácido linoleico. La reducción ruminal del trans-11 C18:1 es incompleta y conduce a una acumulación del compuesto.
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El paso final en la biohidrogenación de los ácidos grasos poliinsaturados es la producción de ácido esteárico (C18:0).
Tabla 2: Composición en ácidos grasos de leche de cabras suplementadas con 30 ml de aceite de pescado (T1) y con aceite de pescado (30 ml) más aceite de girasol (150 ml) (T2).
Ácido graso (%)
T1 Inicial T1 Final T2 Inicial T2 Final
C6:0
1,81
1,7
1,68
1,55
C8:0
2,41
2,79
2,1
2,42
C10:0
9,1
11,19
8,13
8,41
C10:1
0,35
0,72
0,34
0,37
C12:0
4,28
6,9
3,89
3,86
C12:1
0,12
0,16
0,11
0,04
C14:0
10,97
11,51
10,95
8,5
C14:1 + isoC15 :0
0,79
0,56
0,68
0,41
C15:0
1,38
1,85
1,39
1,07
C15:1
0,27
0,25
0,27
0,16
C16:0
29,26
27,18
31,01
21,68
C16:1
1,5
2,3
1,61
1,12
C17:0
0,99
1,23
0,95
0,7
C17:1
0,35
0,33
0,37
0,2
C18:0
8,33
1,15
8,02
1,93
C18:1trans
1,42
7,02
1,38
19,25
C18:1
20,36
8,4
20,82
9,98
C18:2
1,44
1,44
1,48
1,89
C18:3
0,62
0,34
0,61
0,2
CLA
9 cis 11trans
0,89
6,16
1,03
9,89
10 trans, 12 cis
-
-
0,01
-
9 cis, 11 cis
0,02
0,03
0,05
0,05
9 trans, 11 trans
-
0,05
0,11
Total CLA
0,91
6,24
1,09
10,05
C20:4
0,12
0,27
0,13
0,22
C20:5 n3 (EPA)
0,07
0,27
0,09
0,1
C22:6 n3 (DHA)
0,06
0,52
0,06
0,2
La ausencia de un incremento significativo en la concentración de C18:2 en leche ante el aporte suplementario de aceite de girasol (55% de C18:2n 1) sugiere una importante actividad de biohidrogenación ruminal del compuesto.
La drástica disminución en la concentración en leche del ácido esteárico (C18:0) en ambos
tratamientos y el incremento significativo en la
concentración láctea de trans-C18:1 sugieren que el
aceite de pescado resultó efectivo como inhibidor
a nivel ruminal de la biohidrogenación completa
de trans-C18:1 a C18:0. El aceite de pescado es rico en ácidos grasos de
tipo C20 - C22 incluyendo a los ácidos n-3
eicosapentanoico (EPA, C20:5 n-3) y
docosahexanoico (DHA, C22:6 n-3) (Cuadro 1) que inhibirían la acción de las reductasas. El ácido n-3 DHA sería el principal compuesto activo presente en el aceite de pescado que favorece la acumulación del trans-C18:1 en el rumen y la presencia de alguna fuente de ácido linoleico (aceite de girasol o de soja) amplificaría el citado efecto. En el presente trabajo, una mayor disponibilidad del precursor del CLA a nivel mamario (el transC18:1) explicaría el enorme impacto del aceite de pescado sobre la concentración de CLA en la leche de las cabras del T1 ya que ambos ácidos grasos correlacionaron positivamente. Los resultados del presente ensayo confirman que la cabra responde de manera contundente a la suplementación lipídica en cuanto a la concentración de CLA en la leche. En efecto, concentraciones de CLA de hasta un 5,1% han sido observadas en respuesta a la suplementación con aceite de girasol al 6% de la ración en ausencia de aceite de pescado. El rango de concentración en leche de trans-C18:1 y el de CLA resultó muy amplio. Ello implica poder ajustar la suplementación de la cabra a fines de lograr la mejor relación entre ambos o ajustar la concentración individual de cada uno a través del manejo nutricional de los animales. Se ha postulado que un consumo diario de 0,8 g/día de CLA podría ejercer un efecto terapéutico sobre el cáncer en una persona de unos 70 kg. de peso vivo. Cabe comentar que el consumo juzgado preventivo de CLA sería aún unas diez veces menor al enunciado. Los efectos reductores sobre la aterosclerosis se alcanzarían a partir de consumos diarios cercanos a los 0,25 g de CLA y los efectos adelgazantes o antiobesidad de los CLA no están claramente establecidos ni aceptados en el ser humano
Conclusiones
La suplementación de la cabra con aceite de
pescado sólo o combinado con aceite de girasol
resultó una estrategia efectiva para obtener
naturalmente leches y derivados lácteos
diferenciados
por
sus
propiedades
potencialmente benéficas para el ser humano.
El aporte simultáneo de ambos aceites permitió
obtener una leche de muy alta concentración en
CLA y en trans-C18:1 disminuyendo a su vez en
forma significativa el índice de aterogenicidad
del producto.
Esta leche permitiría satisfacer la dosis de CLA
sugerida como potencialmente anticancerígeno y
antiaterogénica en el ser humano a un bajo
consumo diario de producto.
La cantidad más adecuada de aceite de girasol
capaz de mejorar la relación CLA/trans-C18:1 en leche merece ser determinada experimentalmente.
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El suministro de aceite de pescado como único
suplemento lipídico permitió incrementar
significativamente las concentraciones de CLA en
leche con una mejor relación CLA/trans- C18:1 y
un enriquecimiento relativamente bajo de los
ácidos grasos de la serie omega tres (EPA y DHA).
Puesto que el rango de concentración en leche de
trans-C18:1 y el de CLA en las cabras
suplementadas resultó muy amplio resultaría
factible ajustar la suplementación de la cabra a
fines de lograr la mejor relación entre ambos
compuestos o ajustar la concentración individual
de cada uno a través del manejo nutricional de los
animales. Resultará necesario conocer si ciertos
ácidos grasos de configuración trans cuya
concentración resulta aumentada por la
suplementación con aceites son realmente
desaconsejados para la salud de los consumidores.
Referencias
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Para mayor información contactarse con:
M. Alejandra Rodriguez – alerod@inti.gov.ar
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